人工培育有性冬蟲夏草的現狀
20年來，60多個科研單位、數千人在人工栽培冬蟲夏草方面進行了大量的研究、實驗和探索。雲南、四川等地在高海拔地區小面積培育有性類型取得了成功經驗，但由於周期長、推廣對象少、投資大、收益低於高海拔地區自然采集等諸多因素，壹直沒有大面積推廣。在雲南、四川、浙江、甘肅、青海、北京、福建、廣東、貴州、廣西等省(市、區)的中低海拔地區，人工培育有性冬蟲夏草的研究也開展了多年，雖然其中不少在某些方面取得了非常可喜的成果，如雲南、四川兩省在昆明、成都、重慶等地成功繁殖了蛾類昆蟲。在浙江等地，蝙蝠蛾類昆蟲已在室內繁殖成功；但由於沒有解決蟲菌接種和子體批量、重復生長的困難，不能稱之為成功培養。離低海拔小面積、小批量、多次人工培育有性冬蟲夏草的目標還很遠。雖然有幾家公司宣稱已經成功在中低海拔批量培育出有性冬蟲夏草，但實際上科學可信度極低。因為:
(1)目前還沒有人能夠長期穩定地分離培養出正宗的蟲草真菌(即在培養基上反復長出大量的子座)。在青海、雲南、四川、北京等地栽培了基質，但其子囊孢子很少或沒有，生長不穩定，並不代表掌握了中低海拔有性人工栽培技術。
(2)冬蟲夏草的人工無性培養技術相對容易掌握，在室內接種蝠蛾幼蟲即可感染進入僵期，但完成有性形態並長出子座和子囊孢子的情況少見。
(3)除了海拔、氣候、土壤、氣壓等環境因素外，細菌之間是否存在多菌感染？如果是復合感染，哪些細菌在起關鍵作用？它在什麽時期與冬蟲夏草壹起發揮作用？等等，問題不清楚。
因此，在中低海拔地區批量、重復培養性冬蟲夏草需要大量的研究和實驗工作。即使在高海拔地區進行大規模人工栽培冬蟲夏草，仍然需要進行很多技術實驗。因此，人工培育有性冬蟲夏草，要實現規模化或工業化生產，還非常艱巨和遙遠。
(2)人工培養無性冬蟲夏草的現狀
由於人工培育有性冬蟲夏草難度太大，近10年來，大部分開展人工培育冬蟲夏草的單位和科研人員都轉向了無性的研究和應用。由於冬蟲夏草的無性培養技術容易掌握，而且從自然界采集的冬蟲夏草中分離的真菌大多具有與冬蟲夏草有性成分相似的理化性質和藥理作用，所以各地都把自行分離的真菌確定為冬蟲夏草的無性階段，並紛紛辦廠生產菌粉，進行開發應用。目前，自然界中從冬蟲夏草體內分離出的冬蟲夏草有9屬31種，其中北京、吉林、山西、上海、青海、浙江、福建、江西、廣東、雲南、貴州等40多個省(市)發現有16種。菌絲體和分生孢子的深層大規模發酵培養和固體培養作為有性冬蟲夏草的替代品，部分廠家已進入大規模工業化生產，如淩誌膠囊、金水寶膠囊、寧心寶膠囊、心肝寶、冬蟲夏草雞精、冬蟲夏草膠囊、冬蟲夏草酒、冬蟲夏草人參滋補酒等20多種產品，年產值達1000萬元至數億元。而且，由於人工繁殖周期短，產量高，菌絲體和分生組織袍作為冬蟲夏草有性替代品在未來具有很大的開發應用潛力。
為了獲得冬、夏初和草的純品系，必須進行人工分離、純化、復壯和保存。
1.冬蟲夏草的分離技術和條件
(1)材料要求。獲得純菌株需要嚴格的材料；壹般來說，如果采用冬蟲夏草的組織塊分離法，最好的分離材料是每年65438+10月底至165438+10月收集的材料，此時青藏高原高寒草甸的土壤剛剛開始結冰。在這個時期，冬蟲夏草剛剛感染蛾幼蟲，進入僵死階段的時間很短，嫩子芽剛剛長出蟲頭0.2-0.5cm，蟲體內其他雜菌很少。若次年五、六月取材，僵蟲體內及亞座內生活或腐生有多種雜菌，難以獲得純菌株。如果用子囊孢子進行分離培養，最好在每年的7月中下旬，子囊孢子剛剛部分成熟的時候收集分離材料。
(2)操作方法。有三個步驟。
A.僵蟲(即菌核)分離:分離前先用水沖洗主體表面，再用無菌水沖洗2-3次；用0.65min438+0%-0.2%的氯化汞溶液對分離後的材料表面消毒約3-5分鐘；然後用無菌水清洗。選擇以胸部和腳部為邊界的前部。用手術刀切掉表皮，避開消化道，將血腔中的菌絲切成芝麻狀，壓入平板培養基中，每皿1-2粒。在15-19℃培養。當菌落長到0.2-0.5cm時，選取少量菌絲，在平板培養基上反復純化2-4次。確認無其他雜菌後，轉入試管保存培養。
b、分離子芽:將洗凈的子芽從僵蟲頂部切下，放入0.1%氯化汞溶液中消毒2-3min，用無菌水洗凈，切下中間的組織塊，壓入培養基中；培養條件與a相同。
C.子囊菌孢子分離:用透明紙袋覆蓋子囊菌孢子成熟的基質，讓子囊菌孢子彈起粘在紙袋上。然後將裝有子囊菌孢子的紙袋浸入25%葡萄糖溶液中，洗去孢子，置於15-19℃培養，每天進行鏡檢。當袍子發芽後，用微量吸管將單個孢子吸到平板上進行培養。培養條件同a，或者可以將整個成熟的冬蟲夏草帶入室內，用棉紙包裹僵蟲甚至蟲的子座，只留下孕蟲部分，在無菌室中水平放置載玻片，隨時保持主體濕度；每天鏡檢，當子囊孢子彈到載玻片上時，用微量移液器吸到培養皿的培養基中進行培養；培養條件與a相同。
(3)培養基的選擇。
A.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)是所有蟲草真菌的通用培養基，在分離培養初期可以使用，但菌種生長不是很旺盛，容易老化退化。
b增菌培養基(1):多能蛋白臍帶10g，葡萄糖50g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，活蠶蛹30g，生長素0.5μg，瓊脂20g，水1000mL，pH: 5.0。
富集培養基(ⅱ):保藏蛋白40g、葡萄糖40g、去皮鮮馬鈴薯100g、磷酸氫二鉀1g、硫酸鎂0.5g、牛肉醬10g、生長素0.5μg、蝠蛾活幼蟲(粉)30g、瓊脂20g、高山草甸土浸出液1000ml等。
在強化培養基上，菌落比在PDA培養基上生長得更旺盛、更迅速。加福ⅱ優於ⅰ。
2.生長特性在冬蟲夏草的分離培養中，需要掌握對溫度、pH值、光照、碳氮源和無機鹽的利用。
(1)不同溫度對菌絲生長的影響。冬蟲夏草喜歡低溫。在0-4℃能緩慢生長；5-8℃時生長速度加快；10-19℃是該菌株的適宜生長發育範圍；最適生長溫度為15-19℃。當溫度超過20℃時，菌絲生長迅速，菌落由白色變為灰黑色或棕黃色，並開始變異，因此不適合高溫培養。
(2)對pH值的要求。冬蟲夏草是壹種酸性真菌，最適pH值為5.0-6.0。pH值在4.5以下，6以上時，會隨著增減而緩慢增長或不增長。
(3)光線的影響。該菌株在子囊孢子萌發和菌絲生長的前期適應弱光和短光，後期適應強光。在人工培養中，菌絲、分生孢子和基質具有明顯的趨光性，在向陽面生長密集，背光面生長稀疏，在全黑環境中培養的各種細菌細膩、細長、稀疏。
(4)碳源的利用。冬蟲夏草可以利用多種碳源，但葡萄糖和麥芽糖壹起使用時生長最快，單獨使用葡萄糖時也能生長良好，其次是馬鈴薯、蔗糖等澱粉。
冬蟲夏草是壹種從寄生生活宿主生長到腐生階段的真菌，因此可以很好地利用各種有機氮源。而活蟲是最好的；蛋白腖和酵母膏混合使用對生長也非常理想，其次是各自單獨使用，再其次是牛肉醬等等。而硫酸銨、硝酸鉀等無機氮的利用率較差。對灰分養分有壹定需求，在含微量硫酸鎂和磷酸氫二鉀的培養基中生長旺盛，其次是磷酸二氫鉀，也可使用鈉、鈣、鐵、銅等其他無機鹽。
3.培養方法經過分離純化，冬蟲夏草可以作為各種實驗和擴大生產應用。
(1)擴大其產量通常有三種方法:固體靜置培養、搖瓶培養和大罐曝氣發酵培養。
A.靜態培養:主要用於固體培養，如管斜面、三角瓶培養、水稻培養等。在靜態培養中，只要掌握好溫度和光照，細菌就能正常生長。斜面上的分生孢子成熟後，可在1-2℃冰箱中保存8-14個月，也可直接作為種子用於生產。
B.振蕩培養:液體培養和小規模繁殖培養均可。搖動培養基，從固體培養基中減去瓊脂。最好選擇恒溫振蕩培養機，將液體培養基放入三角瓶中，接種試管固體菌種進行培養。經過連續振蕩，液體培養基中的各組分混合均勻，無沈澱，同時促進氣液接觸交換，使氧氣進入液體培養基，有利於菌絲生長和分生孢子形成。
C.大罐通氣發酵培養:大規模生產菌絲體、分生孢子等菌粉時，必須使用大罐通氣發酵培養。在這種方法中，通過抽吸或真空泵減壓進行曝氣，並通過過濾器去除細菌，然後將其送入罐中的液體培養基中，用於冬蟲夏草的生長和發育。
(2)發酵過程。天然冬蟲夏草分離純化→試管斜面種子→振蕩液壹級種子→二級種子→小型種子發酵罐→生產發酵罐→濃縮→噴粉幹燥→成品菌粉。
冬蟲夏草罐內發酵溫度20-25℃，罐壓392.3-686.5kPa(0.4-0.7kg/cmz)，通氣量0.5-1.ovvm *。註入發酵罐的液體培養基應為罐容量的65%-75%。接種量為10%，攪拌速度為180轉/分，培養時間為72-96h，使其可以濃縮和噴粉。
(3)多用途發酵培養基。鮮馬鈴薯(去皮)8%，蔗糖2%，玉米澱粉0.5%，蠶蛹粉1%，蛋白腖0.4%，硫酸銨0.2%，pH值5.5-6.0。
(4)發酵培養產品的標準。分生孢子幾乎是完全分離的雌孢子梗。當孢子梗數沒有明顯增加時，每毫升分生孢子數為654.38±0.8億~ 25億。殘糖低於1%；當氨基氮低於0.2mg/mL時，即可成為成品菌液。
4.冬蟲夏草接種要點:給寄主昆蟲接種有性或無性冬蟲夏草孢子是人工培育有性冬蟲夏草和無性菌株復壯的關鍵措施。
(1)回接期。冬蟲夏草重接的關鍵是選擇寄主昆蟲的弱抗菌期，壹是蛻皮期；二是幼蟲攝食活動劇烈、摩擦損傷率高的時期。
(2)回接法。有兩種。
A.噴灑方法:在蝠蛾幼蟲4-6齡，65，438+0/3以上幼蟲蛻皮時，集中幼蟲，用5%-65，438+00%葡萄糖溶液噴灑在有子囊孢子或分生孢子的蟲體或食物上。接種後，菌液在昆蟲體上稍幹30分鐘左右，幼蟲放回土壤中自然生活。這種方法感染率高，但缺點是幼蟲不易從土壤中取出集中，集中時幼蟲有自相殘殺的習性。蟲子被咬後，很容易被雜菌感染而死亡。當冬蟲夏草的菌絲沒有充滿體腔時，受傷的蟲體就會腐爛，不能形成剛性的蟲體(菌核)。
B.自然接觸法:在大面積半自然土壤中飼養蝠蛾幼蟲，定期采取小樣本觀察幼蟲的生長狀況。當幼蟲大部分適合被感染時，用飼料植物浸泡液種植並接種細土，均勻地撒在飼養昆蟲的表面，然後噴水使細菌滲入土壤，使幼蟲在取食活動中暴露於感染。這種方法感染率不太高，但壹旦感染，冬蟲夏草生長良好，未感染的蝠蛾幼蟲也能正常生長繁殖。
(摘自楊·《中國昆蟲資源的利用與產業化》)摘自《中國昆蟲資源的利用與產業化》。
初夏草冬季栽培技術
(壹)概述冬蟲夏草別名，冬蟲夏草，冬蟲夏草。它是冬蟲夏草(Berk。)Sacc。壹種屬於麥角科冬蟲夏草屬的植物，以及它的奇怪主人的幹燥昆蟲屍體。甘，文。養肺補腎，主要用於治療肺結核、咯血、虛喘、盜汗、遺精、陽痿、腰膝酸軟。多生於高山、草原、河谷、草地。分布在甘肅、青海、四川、雲南、西藏等省區。
(2)植物特征冬蟲夏草是寄生於鱗翅目蛾類幼蟲的屬於子囊菌綱、食肉目、麥角菌科和蟲草屬的真菌的組合。整個形狀由蟲體和子實體組成，外觀為黃褐色或黃褐色。蟲體很像蠶，細長圓柱形，長3 ~ 5厘米，厚0.3 ~ 1厘米，有20 ~ 30個明顯的環節，腹部有8對，尤其中間有4對。子實體是指延伸到寄主昆蟲外面的部分。經過菌絲的反復打結和分化，肉眼可以識別的生殖器官。質地脆，橫切面黃白色，頭紅褐色，有子莢。子莢多單生，細長如棍，長4 ~ 10 cm，頂端膨大，表面褐色，質地稍韌，黃白色，橫切面纖維狀。子莢頭部散生或密生有子囊菌，子囊菌內形成無數子囊菌，子囊菌是能有性繁殖的子囊孢子。
(3)生長特征冬蟲夏草的分布與地形、地貌和海拔高度密切相關。其主要蛾類喜歡生長在潮濕、低溫、陽光充足、排水良好的地形和地貌上。
(4)栽培技術
1，培養條件人工培養冬蟲夏草主要是準備菌種和昆蟲。
(1)菌種冬蟲夏草的栽培首先要有優良的純菌種，首先要早熟高產，主要目的是縮短生產周期，降低成本。二是要有傳染性，要求菌株生命力強，存活率在95%以上，能迅速感染昆蟲，盡快生病死亡。三是適應範圍廣，特別是對環境溫度變化等雜菌感染。
(2)蟲蟲主要是利用蛾類巴貝斯蟲的幼蟲作為冬蟲夏草的寄生蟲。幼蟲必須是活的、大的、肥胖的，數量取決於自己的養殖。壹般每平方米需要幼蟲1公斤，母種1粒，細沙50公斤，可長出鮮蟲草0.5公斤，幹品0.05克，價值100元。
(3)人工栽培環境冬蟲夏草，不管海拔高低都可以，關鍵是溫度。冬蟲夏草是壹種中低溫真菌。菌絲生長和繁殖的最適溫度為5 ~ 32℃，最適溫度為12 ~ 18℃，菌核和基質形成的最適溫度為10 ~ 25℃。
(4)栽培季節可利用自然溫度，壹年可栽培兩次，春季3-5月，秋季9-165438+10月。如果室內控制溫度，壹年四季都可以栽培，生長期可以縮短。
2.栽培方法冬蟲夏草的栽培方法有室內室外瓶栽、箱式栽培、床栽、露地栽培等多種。，而且妳可以根據自己的條件選擇任意壹個。無論哪種栽培方式，栽培前都要先培養細菌和昆蟲，讓昆蟲在入土前感染上這種攜帶病毒的菌液，入土後病得不能到處爬，有利於早死、快出苗、整齊生長。
菌蟲的培養方法是用噴霧器將配制好的液體菌種噴在幼蟲身上，每天噴兩次，直到濕潤為止。3天後，被菌液浸泡的幼蟲出現呆滯、昏迷狀態，可培養。
(1)瓶栽適合家庭栽培。普通罐頭瓶子洗幹凈後，先在瓶子裏放壹層土壤含水量為60%的細沙，再把感染了菌液的幼蟲放在上面。每個瓶子裏放兩個幼蟲為宜。要求兩仔魚不靠近，腹面向下，表面拉伸，細沙覆蓋3 cm，表面略平。為了保持濕潤，要用塑料薄膜密封，並在合適的室內外溫度下管理，避免陽光直射。
(2)箱型栽培也適合家庭栽培，大小木箱、塑料盆均可栽培。木箱底部和四周要有塑料薄膜，防止水分流失。先鋪上5-7厘米厚的細沙，然後均勻地放上菌蟲，每蟲間距2-3厘米，再蓋上3-5厘米的沙司。表面要用塑料薄膜保濕。為了節省空間，妳也可以把木箱重疊起來。
(3)植床床架栽培是壹種大規模生產的發展模式，壹般適用於室內，可以充分利用室內空間進行架栽，節省空間。床架寬100 cm，根據自己房間的設計，采用竹木材質。每層四邊高12 cm，用於擋土。栽培時先鋪壹層塑料薄膜，然後倒5-7厘米細沙壓平，再放入菌蟲，隔3-5厘米種在箱子裏，再蓋上塑料薄膜。
(4)露地栽培是指室外栽培。室外栽培的關鍵是選擇好場地。壹是要避免陽光直射和雨水侵蝕，達到能遮陽、排水、防旱、防止人畜踐踏的環境。栽培方式有兩種:平式或畦式。平地栽培是將寬度為100cm、長度不限的壹般平地、蓋地、荒地的表層土去掉，然後填入5 cm厚的沙子，按上述方法放入菌蟲，用5-7 cm的細沙覆蓋，用塑料薄膜覆蓋。周圍要有排水溝，上面要搭樹或遮蔭棚遮陰。
(5)畦耕畦耕可以避免陽光和高溫的問題，適合農村耕種。邊框寬度100 cm，深度50 cm，長度不限。周邊也可以排水。栽培時，在畦底鋪5厘米厚的細沙，然後按上述方法放入菌蟲，再在細沙上蓋5厘米，最後蓋上塑料薄膜。邊框旁用竹拱門，覆蓋草簾遮陽降溫。
3.管理技術冬蟲夏草栽培後的管理技術很簡單，主要是溫度、濕度、光照、空氣等方面。
(1)溫度冬蟲夏草對溫度要求較寬，壹般是先低後高，但太低了寧願生長緩慢，太高了也不受影響。菌絲在12-18℃生長，但溫度低時存活率高。壹般-40℃不會凍死，高於40℃就會凍死，20 ~ 25℃有利於子體生長後期的生長。
(2)濕度和濕度管理是冬蟲夏草生長發育的關鍵。昆蟲體內的營養和濕度基本能滿足其生長需求。它不需要外界的營養和濕度，只需要外界的物體就能保持昆蟲身體不易幹燥的溫度。因此，隨時保持沙子濕潤為宜，含水量要達到60%。如果幹燥，可以噴少量清水保持濕潤。
(3)光照冬蟲夏草栽培不需要強光，避光比較好，發育後期用散光比較好，但不能讓陽光直射，特別是室外栽培，要用林蔭、人工遮蔭棚、草簾覆蓋遮光。
(4)氣傳冬蟲夏草菌絲體生長階段不需要大量空氣，特別是子座即將離地時，應立即揭去塑料薄膜，補充空氣，以利於子座生長，空氣相對濕度保持在75% ~ 95%左右，采挖10 ~ 20天後成熟。
(5)采收加工在自然條件下，冬蟲夏草的生長期壹般為9個月，品種性狀的成熟標準主要決定生長速度。當基質高3 ~ 5厘米，頂端發育成子囊果“毛筆尖”時即可采收。
采收方法:用竹竿、木桿輕挖根啤，挑出冬蟲夏草，放入筐中。註意不要弄壞蟲身和副座，更不要劃傷蟲身或副座。收獲後，用水沖洗沈澱物，並及時放在陽光下或曬幹。
加工方法:包裝好的冬蟲夏草是以松散的冬蟲夏草為原料加工而成。也就是說，松散的冬蟲夏草回潮後要拉直，每7 ~ 10條紮成小捆，用小火烘烤，直到完全幹透。48小捆的尾部要放入鐵格子，分三層包裝，每層16件以上。擠出後要熏蒸幹燥，商標要用紅絲繩紮牢。按規範，每封冬蟲夏草應保持在0.25g左右，用木箱包裝，內村加壹層防潮紙，用鐵箍捆紮，存放在通風幹燥處。
文章來源:唐漢中醫藥商業網
二、人工培育冬蟲夏草:
人工培育至少要解決四個問題。
壹個是壓力。菌種多為來自自然界的冬蟲夏草，通過常規分離培養獲得。據研究，冬蟲夏草有性形態發生過程中，需要壹定的溫度來滿足體內復雜的生理變化所需的水分，溫度和濕度存在相關性。在壹定濕度下，緩慢或恒定的溫度變化不利於子實體的提取，有性形態的發生必須進行低溫加濕處理。福建省三明市真菌研究所經過多年的轉筒培養，只長出未成熟的幼嫩子座。他們認為冬蟲夏草的生成必須在蝙蝠蛾幼蟲的壹些活性物質參與下完成。
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