《第十二夜》主要內容如下：
塞巴斯蒂安和薇奧拉這壹對孿生兄妹，在壹次海上航行途中不幸遇難，他們倆各自僥幸脫險，流落到伊利裏亞。薇奧拉女扮男裝給公爵奧西諾當侍童，她暗中愛慕著公爵，但是公爵愛著壹位伯爵小姐奧麗維婭。可是奧麗維婭不愛他，反而愛上了代替公爵向自己求愛的薇奧拉。
經過壹番有趣的波折之後．薇奧拉與奧西諾，奧麗維婭與塞巴斯蒂安雙雙結成良緣。盡管奧麗維婭原先愛的不是塞巴斯蒂安。但他的面孔與薇奧拉全然相同，這也算滿足了她的心願。這部作品以抒情的筆調，浪漫喜劇的形式，再次謳歌了人文主義對愛情和友誼的美好理想，表現了生活之美、愛情之美。
創作背景如下：
此劇的故事情節來自羅馬劇作家普勞圖斯的《孿生兄弟》和意大利的戲劇《英甘尼》。在意大利，以《英甘尼》為題的戲劇就有三種，作者分別是尼古拉·塞奇和卡茲奧·貢紮加，還有壹種是流傳甚廣的逸名作品，有法文譯本和西班牙文譯本。英國作家裏奇（Riche）還根據法文翻譯的逸名劇編寫過壹個題為《阿波隆紐斯和西拉》的散文作品，這可能是莎士比亞最直接的來源。
此外，莎土比亞還可能參照過無名氏的劇本《克拉姆農爵士和克萊姆德斯爵士》（1570—1583）、錫德尼的《阿卡狄亞》（1590）和伊曼紐爾·福德的散文羅曼史《帕裏斯墨斯》。有學者認為，有關馬伏裏奧的描寫影射了伊麗莎白女王宮廷裏的壹位名叫威廉·諾裏斯的侍臣。
在1594年寫的《錯誤的喜劇》中，莎士比亞寫兩對雙胞胎，由於長得壹模壹樣，被周圍的人認錯，鬧了不少笑話。最後大家碰在壹起，才消除誤會，以大團圓告終。《第十二夜》和《錯誤的喜劇》的手法有些相似。