當前位置:商標查詢大全網 - 遊戲電競 - 請問細胞活性的生理生化指標有哪些?

請問細胞活性的生理生化指標有哪些?

細胞活性測定方法有臺盼藍染色法、克隆(集落)形成法、3H放射性同位素摻入法、MTT法等。其中MTT法以其快速簡便,不需要特殊檢測儀器、無放射性同位素、適合大批量檢測的特點而得到廣泛的應用。但MTT法形成的Formazan為水不溶性的,需要加有機溶劑溶解,由於在去上清操作時會有可能帶走小部分的Formazan,故有時重復性略差。為了解決這個問題,研究人員又開發了很多種水溶性的四氮唑鹽類:如XTT、CCK-8(WST-8)等。

現就這三種四氮唑鹽類方法作壹個簡單介紹:

1.MTT法

MTT:化學名: 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍。檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲 (Formazan)並沈積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲 ,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在壹定細胞數範圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於壹些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。

缺點:由於MTT經還原所產生的甲 產物不溶於水,需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加,也會對實驗結果的準確性產生影響,而且溶解甲 的有機溶劑對實驗者也有損害。

2.XTT法

XTT:化學名:2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]

-2H-tetrazolium hydroxide,作為線粒體脫氫酶的作用底物,被活細胞還原成水溶性的橙黃色甲 產物。當XTT與電子偶合劑(例如PMS)聯合應用時,其所產生的水溶性的甲 產物的吸光度與活細胞的數量成正比。

優點:1、使用方便,省去了洗滌細胞;2、檢測快速;3、靈敏度高,甚至可以測定較低細胞密度;4、重復性優於MTT。

缺點:XTT水溶液不穩定,需要低溫保存或現配現用。

3.CCK-8法或稱WST-8法

CCK-8試劑中含有WST–8:化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽],它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲 產物(Formazan)。生成的甲 物的數量與活細胞的數量成正比。用酶聯免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。該方法已被廣泛用於壹些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞增殖試驗、細胞毒性試驗以及藥敏試驗等。

優點:1、使用方便,省去了洗滌細胞,不需要放射性同位素和有機溶劑;2、檢測快速;3、靈敏度高,甚至可以測定較低細胞密度;4、重復性優於MTT;5、對細胞毒性小;6、為1瓶溶液,毋需預制,即開即用。

缺點:1、與MTT相比,CCK-8和XTT的價格比較貴。2、CCK-8試劑的顏色為淡紅色,與含酚紅的培養基顏色接近,不註意的話容易產生漏加或多加。