現就這三種四氮唑鹽類方法作壹個簡單介紹:
1.MTT法
MTT:化學名: 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍。檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲 (Formazan)並沈積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲 ,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在壹定細胞數範圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於壹些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點:由於MTT經還原所產生的甲 產物不溶於水,需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加,也會對實驗結果的準確性產生影響,而且溶解甲 的有機溶劑對實驗者也有損害。
2.XTT法
XTT:化學名:2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]
-2H-tetrazolium hydroxide,作為線粒體脫氫酶的作用底物,被活細胞還原成水溶性的橙黃色甲 產物。當XTT與電子偶合劑(例如PMS)聯合應用時,其所產生的水溶性的甲 產物的吸光度與活細胞的數量成正比。
優點:1、使用方便,省去了洗滌細胞;2、檢測快速;3、靈敏度高,甚至可以測定較低細胞密度;4、重復性優於MTT。
缺點:XTT水溶液不穩定,需要低溫保存或現配現用。
3.CCK-8法或稱WST-8法
CCK-8試劑中含有WST–8:化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽],它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲 產物(Formazan)。生成的甲 物的數量與活細胞的數量成正比。用酶聯免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。該方法已被廣泛用於壹些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞增殖試驗、細胞毒性試驗以及藥敏試驗等。
優點:1、使用方便,省去了洗滌細胞,不需要放射性同位素和有機溶劑;2、檢測快速;3、靈敏度高,甚至可以測定較低細胞密度;4、重復性優於MTT;5、對細胞毒性小;6、為1瓶溶液,毋需預制,即開即用。
缺點:1、與MTT相比,CCK-8和XTT的價格比較貴。2、CCK-8試劑的顏色為淡紅色,與含酚紅的培養基顏色接近,不註意的話容易產生漏加或多加。