壹、操作程序:
1.實驗前，用紫外線照射無菌室和無菌操作臺30-60分鐘進行滅菌，用70%酒精擦拭無菌操作臺，打開無菌操作臺的風扇10分鐘，即可開始實驗操作。壹次只處理壹個細胞，以避免細胞的交叉汙染。實驗結束後，將實驗物品從桌子上拿出來。如果需要繼續下壹個實驗，用70%的酒精擦拭無菌操作臺，然後讓無菌操作臺的風扇運轉10分鐘，才能進行下壹個實驗。
2.無菌操作的工作區域應保持清潔和寬敞。必要的物品，如試管、移液管或吸管等可以臨時放置，其他實驗物品用後要及時取出，以利於氣體流通。實驗物品在進入無菌手術臺前，應用70%酒精擦拭。實驗操作應在控制臺中央的無菌區進行，不要在邊緣的非無菌區進行。
3.小心取出無菌實驗用品，避免汙染。不要觸摸吸管和吸頭的頭部或容器的瓶口，不要在開口容器的正上方操作實驗。容器打開後，用手握住瓶蓋，握住瓶體，傾斜45°左右，盡量不要把瓶蓋的蓋子朝上放在桌子上。
4.工作人員應註意自身安全，進行實驗前必須穿實驗服，戴實驗手套。對人源或病毒感染的細胞株應特別註意，應選擇適當級別的無菌手術臺(至少兩級)。在操作過程中，避免產生氣溶膠，小心有毒試劑，如DMSO和TPA，避免尖銳物體傷人。
5.定期檢查以下項目:CO2氣瓶中的CO2壓力；CO2培養箱內的CO2濃度和溫度，水盤是否被汙染；無菌操作臺內氣流壓力是否正常，定期更換紫外線燈管、HEPA過濾膜和預過濾(300小時/預過濾，3000小時/HEPA)。
二、粉末細胞培養基的制備(以1L為例):
細胞培養液通常需要添加10%血清，所以粉末培養液的配制體積為900 ml，pH為7.2-7.4。單獨加入碳酸氫鈉。如果在液體培養基中直接添加碳酸氫鈉粉末，會造成pH值誤差或局部過堿性。因此，粉末培養基和NaHCO3粉末在混合前應分別溶解，然後用CO2氣體調節pH，而不是強酸(HCl)或強堿(NaOH)，因為氯離子可能會影響細胞生長，培養基的pH值在儲存過程中容易發生變化。
試劑和設備
1.純凈水(milli-Q水或二級或三級蒸餾水，水質非常重要)
2.粉末介質(1640，DMEM等。)
3.碳酸氫鈉(適馬S-4019)
4.電磁攪拌器
5.無菌血清瓶
6.0.22微米無菌濾膜
7.pH計
8.真空活門
9.二氧化碳氣體
準備步驟
1.將粉末培養基溶解在700 ml milli-Q水中，並攪拌使其溶解。
2.稱取適量NaHCO3粉末(根據培養基的種類不同而不同)溶於200ml Milli-Q水中，攪拌使其溶解，然後通入CO2氣體至飽和，約3-5min。
3.將含有飽和CO2的溶解的NaHCO3溶液加入到溶解的液體培養基中並混合。混合溶液的pH值應在7.2-7.4，除非pH值偏差過大，否則不必用酸堿調節。如果堿性太強，可以引入CO2氣體來調節pH值..當培養基真空通過濾膜時，pH會增加0.1-0.2。
4.用0.1或0.2 mm無菌濾膜過濾滅菌，同時分裝於無菌容器中，標明培養基的種類、日期、瓶號，4℃保存(也可在培養基中加入血清過濾)。
5.制備的培養基必須進行生長和汙染試驗。
需要註意的事項
1.液體培養基在4℃冰箱中避光保存，實驗前在37℃水槽中加溫。
2.液體培養基(含血清)貯存期為六個月，在此期間谷氨酰胺可能分解。如果細胞生長不良，可以加入適量的谷氨酰胺。