這種比較老的技術正逐漸被淘汰,但投入少,技術含量低,人員稍加培訓即可操作。
2.懸浮培養
壹種非貼壁細胞的培養方法。
細胞懸浮在培養基中生長或維持。經過適應和選擇,壹些貼壁依賴細胞也可以用這種方法培養。增加懸浮培養的規模相對簡單,只要增加體積就可以了。深度超過5mm時,需要攪拌培養基,超過10cm時,需要深度通入CO2和空氣,保證充分的氣體交換。
壹種培養方法,通過振蕩或旋轉裝置使細胞始終分散並懸浮在培養液中。
利用固體瓊脂培養基離體培養植物組織的方法已廣泛應用於植物遺傳實驗中。但是,這種方法在某些方面仍有不足之處。例如,在培養過程中,植物愈傷組織的營養成分和植物組織產生的代謝物質呈梯度分布,瓊脂本身存在壹些未知的可能影響培養的物質,可能導致植物組織在生長發育過程中的代謝變化。這個缺點可以通過使用液體培養基來克服。當植物組織在液體培養基中生長時,我們可以通過薄層振動培養或通氣來提高培養基中的供氧量。植物細胞懸浮培養是指將植物細胞或較小的細胞團懸浮在液體培養基中,在培養過程中能保持良好的分散性。這些小細胞聚集體通常來自植物愈傷組織。
壹般的操作過程是將未分化的愈傷組織轉移到液體培養基中培養。在培養過程中,可以以100 ~ 120 r/min的速度進行連續旋轉振動。由於液體培養基的旋轉和振動,愈傷組織上分裂的細胞不斷遊離。混合液體培養基中的培養物,包括遊離單細胞、大細胞團和接種物的死細胞殘余物。
在液體懸浮培養的過程中,要及時註意細胞的繼代培養,因為當培養物生長到壹定時期,就會進入分裂的靜止階段。對於大多數懸浮培養,細胞在18 ~ 25天時達到最大密度,此時應進行第壹次繼代培養。在傳代培養中,應去除較大的細胞團塊和接種物殘留物。如果從植物器官或組織建立細胞懸浮培養系統,它包括愈傷組織誘導、繼代培養、單細胞分離和懸浮培養。目前,該技術已廣泛應用於細胞形態、生理、遺傳和雕亡的研究,特別是為基因工程在植物細胞水平上的操作提供了理想的材料和途徑。將轉化的植物細胞誘導分化形成植株,並獲得攜帶目的基因的個體。