國家規定蜂花粉分3個等級,分等質量指標見表7。
表7 蜂花粉分等質量指標
表7 蜂花粉分等質量指標(續)-1
註:碎團粒指標指基層收購時的限量。
檢驗方法分為感官檢驗和理化檢驗兩個方面。
(1)感官檢驗
用目測或放大鏡觀察、鼻嗅、口嘗、根據花粉的顏色、狀態、氣味、滋味進行判斷。
①雜質測定
收購時,目測無明顯雜質,將手插入蜂花粉包裝袋內,彎回手指慢慢從包內提出,指上無砂粒、細土,即表明較純凈。或精確稱取蜂花粉樣品約100克,放入搪瓷盤內,揀出雜質稱定,用下列公式計算雜質:
雜質=雜質重量(克)/樣品重量(克)×100%
②單壹花粉團率測定
也稱計數法,即隨機從蜂花粉包裝內取出蜂花粉團數克,用手數出100粒,揀出其中本蜜源植物的蜂花粉團粒,用下列公式計算:
單壹花粉團率=揀出本蜜源植物蜂花粉團數(粒)/數出蜂花粉團總數(粒)×100%
不易根據色澤區分蜂花粉團粒品種時,可用顯微鏡檢驗區別。
③水分測定
也稱烘箱幹燥法。精密稱取蜂花粉樣品約10克,置於已幹燥至恒重的培養皿或鋁制淺盤中,樣品厚度約為5毫米,放入電熱鼓風幹燥箱內,在105℃下幹燥2~4小時後取出,置於幹燥器,冷卻至室溫後稱重。在同壹溫度下重復幹燥1小時左右,直至恒重(兩次重量差不超過2毫克)。按下列公式計算:
水分=B-C/B-A×100%
式中A為培養皿重量(克),B為樣品與培養皿重量(克),C為B達到恒重時的重量(克)。平行試驗結果允許誤差為±0.4%。
④碎團粒測定
稱取蜂花粉樣品約50克,用20目分樣篩篩出碎粒及粉末並稱重,用下列公式計算:
碎團粒=篩出碎團粒重量(克)/蜂花粉樣品重量(克)×100%
⑤蛋白質測定
采用凱氏定氮法,平行實驗結果允許誤差為±0.6%。
試劑:
濃硫酸(分析純)
硫酸銅硫酸鉀混合試劑:稱取含5個結晶水的硫酸銅3克,硫酸鉀9克,置研缽中混合均勻,研細。
田氏混合指示劑:吸取0.1%次甲基藍乙醇溶液50毫升和0.1%甲基紅乙醇溶液200毫升混合搖勻,貯存於棕色瓶中。
2%硼酸溶液:稱取硼酸2克,加蒸餾水約50~60毫升使之溶解並稀釋至100毫升,搖勻,然後滴加田氏混合指示劑,振搖至溶液呈紫紅色。
0.1摩爾/升鹽酸標準溶液:量取濃鹽酸9毫升加蒸餾水稀釋至1000毫升搖勻。
標定:精確稱取270~300℃幹燥至恒重的基準無水碳酸鈉0.15克,置於150毫升錐形瓶中,加蒸餾水50毫升使其溶解,滴入田氏混合指示液2滴,用上述鹽酸溶液滴定至溶液由綠色變為紫紅色為終點,用下列公式計算鹽酸的摩爾濃度(M):
M=W/V×0.106
式中 V——鹽酸溶液消耗的體積(毫升);
W——無水碳酸鈉的重量(克)。
將0.1摩爾/升鹽酸溶液用蒸餾水稀釋10倍,即為0.01摩爾/升鹽酸標準溶液(用前配制)。
40%氫氧化鈉溶液。
儀器及裝置:萬分之壹天平、消化管、容量瓶、錐形瓶、移液管、25毫升滴定管、量筒、凱氏定氮半微量蒸餾裝置壹套、調溫式遠紅外消煮用電爐。
測定步驟:
消化:精確稱取已研細、混勻的蜂花粉樣品約50~60毫克,置於消化管中,加入300克硫酸鉀、硫酸銅混合試劑和3毫升濃硫酸,將消化管插入調溫式遠紅外消煮電爐孔中,接通電源,在通風櫥中消化,待消化液呈清澈的亮綠色時消化即告完畢(消化時間約1小時)
蒸餾:消化液冷卻後,將其定量轉移到蒸餾器中,並用少量蒸餾水沖洗消化管數次,沖洗液並入蒸餾器中。向蒸餾器中加入11~12毫升40%氫氧化鈉溶液後,加入5毫升蒸餾水(壹半流入蒸餾器,壹半在玻璃杯中作水封),用調溫電爐開始蒸餾,用盛有10毫升2%硼酸溶液的錐形瓶吸收蒸餾放出的氮,待錐形瓶內溶液的顏色由紫紅色變為綠色時,繼續蒸餾2~3分鐘,停止蒸餾。
滴定:用0.01摩爾/升鹽酸標準溶液滴定錐形瓶中吸收的氨量,滴定至溶液由綠色變為淡紫紅色為終點,用下列公式計算:
蛋白質(%)=(VA-VB)×M×0.014×6.25/W×100
式中 VA——滴定樣品消耗的鹽酸標準溶液毫升數;VB——滴定空白消耗的鹽酸標準溶液毫升數;
M——鹽酸標準溶液的摩爾濃度;
W——稱出樣品的克數;
0.014——1毫克氮的克數;
6.25——氮轉換為蛋白質的系數。
⑥維生素C測定:
采用2,6-二氯酚靛酚鈉鹽滴定法,平行試驗結果的允許誤差為0.3毫克/100克。
試劑:
2%草酸溶液。
標準維生素C溶液:精密稱取維生素C(分析純)約20毫克,置於100毫升容量瓶中,用2%草酸溶液稀釋至刻度,搖勻(臨用前配制)。
2,6-二氯酚靛酚鈉溶液:稱取2,6-二氯酚靛酚鈉(分析純)約50毫克,溶於50毫升熱蒸餾水中,冷卻後定量移入250毫升容量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度,貯存於棕色瓶中,置冰箱中保存。
標定:精確吸取標準維生素C溶液2毫升,加2%草酸溶液5毫升,用2,6-二氯酚靛酚鈉溶液滴定至桃紅色,在15秒鐘不褪色為終點,根據已知標準維生素C溶液和2,6-二氯酚靛酚鈉溶液用量,按下列公式計算1毫升2,6-二氯酚靛酚鈉溶液相當於維生素C毫克數:
W=A×2/V
式中 W——1毫升2,6-二氯酚靛酚鈉溶液相當於維生素C毫克數;
A——1毫升維生素C標準溶液所含維生素C毫克數;
V——滴定2毫升維生素C標準溶液所消耗2,6-二氯酚靛酚鈉溶液毫升數。
15%亞鐵氰化鉀溶液。
30%醋酸鋅溶液。
儀器:減壓抽濾裝置壹套、托盤扭力天平及常用玻璃器皿等。
測定步驟:
樣品配制:精確稱取蜂花粉樣品約10克,置於研缽中,加少許2%草酸溶液研細,定量移入100毫升容量瓶中,力口2%草酸溶液稀釋至刻度,加入15%亞鐵氰化鉀溶液數毫升,然後加30%醋酸鋅溶液數毫升(以溶液不沈澱為止),過濾備用。
滴定:精確吸取樣液10毫升,置於錐形瓶中,用2,6-二氯酚靛酚鈉溶液滴定至呈桃紅色,在15秒鐘不褪色為終點,記下2,6-二氯酚靛酚鈉溶液的毫升數,用下列公式計算:
W=(V-V1)×N/B×b/a×100
式中 W——100克蜂花粉團樣品中含維生素c毫克數;
V1——滴定空白所消耗的2,6-二氯酚靛酚鈉溶液的毫升數;
N——1毫升2,6-二氯酚靛酚鈉溶液相當的維生素C毫克數;
B——滴定所取樣品溶液的毫升數;
a——樣品的克數;
b——樣品溶液的總毫升數。
⑦灰分測定:
儀器:萬分之壹分析天平、高溫爐、坩堝。
測定步驟:精確稱取蜂花粉樣品約10克,放入已恒重的坩鍋中,在105℃烘箱中幹燥至近恒重,在300℃下灼燒至完全炭化,移入高溫爐中,在600℃灼燒至完全灰化,冷卻至200℃以下後放入幹燥器內,冷卻至室溫精確稱重,直至恒重。用下列公式計算結果:
灰分(%)=W2-W3/W1-W3×100
式中 W1——坩堝和樣品的重量(克);
W2——坩堝和灰分的重量(克);
W3——灼燒至恒重的坩堝重量(克)。
平行試驗允許誤差為±0.3%。
⑧過氧化氫酶測定——氣量法:
儀器:Xu-Hu型氣量法蜂花粉活性檢測儀。
試劑:
3%過氧化氫溶液:取30%的過氧化氫溶液稀釋10倍。
測定步驟:
把潔凈水倒入水浴槽至產氣管架處,接通電源,調節控溫器使指示燈亮度達到最大。當水溫升到38℃時,調節控溫器使指示燈熄滅,待水溫恒定在37℃並保持5分鐘後再用。
精確稱取蜂花粉樣品約0.5克置於小燒杯中,加入1毫升蒸餾水,用圓頭玻璃棒把蜂花粉團碾成均勻的蜂花粉水懸液。
用帶三通閥門的5毫升產氣管,吸取全部蜂花粉水懸液,排除空氣,關閉閥門,放入37℃水浴槽中10分鐘(簡稱A管)。
用另壹產氣管吸取3%過氧化氫溶液5毫升,排除空氣,關閉閥門,放入37℃水浴槽中10分鐘(簡稱B管)。
10分鐘後,將A、B兩管從水浴槽中取出,打開B管閥門,排除空氣,將A管與B管接口聯好,然後從B管給A管中註入1毫升過氧化氫溶液,關上閥門,把A管放入37℃水浴槽中,同時計時,記錄2分鐘後的產氣量(毫升),並按下式計算過氧化氫酶單位:
過氧化氫酶單位=1268×V
式中 1268——37℃下1毫升氧氣的重量(微克);
V——37℃下1克蜂花粉1分鐘內所產生的氧氣體積(毫升)。
平行試驗結果的允許誤差為50過氧化氫酶單位。